1、 仔细阅读说明书。
2、 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期，请勿使用。
3、 按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）。
4、 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。 短期内无法实验者，注意低温保存。
5、 准备好所有实验额外所需物品（比如移液器，试管，清洗器，酶标仪）。
6、 按说明书将所用试剂平衡至室温，根据检测标本数量确定所需试剂的量。
7、 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件，保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。
8、 检查不稳定或者变质的试剂溶液（比如沉淀或变色）。有些试剂，比如标准品稀释液或者检 测稀释液，可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前，必需充分混匀。而由于沉淀物的特性，在加入酶标板之前，必需不停搅拌。
9、 保证充分的孵育时间和温度。
10、 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
11、 在混合或溶解蛋白溶液时，避免泡沫产生。
12、 在实验开始之前，安排好实验流程。
13、 在实验开始之前，清洁工作台。
ELISA实验中务必注意事项
1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但需要有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、ELISA试剂盒实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
10、ELISA试剂盒对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
